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                    如何獲取可溶性蛋白

                    如果需要獲得具有一定活性的表達蛋白,那么最好讓蛋白可溶形式表達,避免包涵體形成。避免包涵體的方法很多,比如:選用表達量不高的表達系統,選擇有助于可溶性表達的融合表達系統比如pThio,pMal等等,對于T7系統來說降低或者減少誘導條件(例如降低ITPG濃度減少T7聚合酶)從而降低表達速度,使用基本培養基等也有助于可溶性表達。另外一個容易忽視的問題是大腸桿菌內還原性過高會導致二硫鍵不能正確形成,同樣容易導致表達產物不溶,更換菌株例如Novagen的Origami系列也有助于解決這個問題。還有一種方法是當蛋白掛在柱子上的時候,在還原和氧化的谷胱甘肽存在的情況下用濃度從6M到0M的鹽酸胍過柱,促使蛋白的折疊。在蛋白重新折疊后用咪唑洗脫。德泰的上清蛋白表達服務通過條件矩陣正交優化的方法,使重組蛋白表達在上清液中,即獲得具有相當活性的表達蛋白

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